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临床实验室生物安全和职业防护
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• 一、临床实验室
生物安全的重要性
• 二、临床实验室生物安全相关术语和定义
• 三、临床实验室生物安全操作技术规范
• 四、临床实验室仪器设备的使用
• 五、临床实验室标本的安全操作
• 六、临床实验室医护人员职业暴露处理原则
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一
临床实验室生物安全的重要性
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涉及病原微生物实验室生物安全法律法规与监督管理 法律: :
中华人民共和国传染病防治法
法规: :
病原微生物实验室生物安全管理条例、医疗废物管理条例
规章: :
传染性非典型肺炎病毒的毒种保存、使用和感染动物模型的暂行管理办法、传染性非典型肺炎病毒研究实验室暂行管理办法、 人间传染的病原微生物名录
标准: : 《 实验室生物安全通用要求 》 （ GB19489 － 2008 ）、《 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 》 （ WS 233 － 2002 ）、 《 生物安全实验室建设技术规范 》
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重硬件，轻软件 把生物安全当做科学实验之外的“行政”任务 谁来强制执行 ？
目前存在的普遍问题 5
经血或体液传播的职业暴露 经皮肤或粘膜暴露
HIV 、 HBV 、 HCV 感染为主
传播方式：针刺或其他锐器损害
病毒入皮肤抓伤、皮损、擦伤、烧伤
病毒因意外溅入眼、鼻、口
三种病毒不会经空气传播
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HBV 、 HCV 和 HIV 职业感染
的相对危险性
病毒
HBV
HCV
HIV
健康工作者的血清阳转率 （% % ）
3 3 － 35
1 1 － 28
0 0. . 12 －0 0. .4 4
每 ml 血中病毒颗粒数
10 2 2 － 10 8 8
10 － 10 6 6
10 － 10 3 3
针头刺伤的传播概率
6 6 － 30
0 0. . 75 － 10
0 0 －3 3
美国 CDC
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全球卫生保健人员被针刺伤
病种
传染力
流行率
( ( 中国) )
HBV
30%
14%
HCV
6%
4.1%
HIV
0.3%
<0.1%
备注：传染力是感染快慢的表示
流行率是指流行的普遍程度
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HIV 职业暴露 平均 感染率 皮肤破损 0.33% （ 0.2-0.5% ）
粘膜接触 0.09% （ 0.06-0.5% ）
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临床实验室发生HIV 职业暴露 疾控中心
医院
妇产科
护士
检验科 10
实验室感染取决于 病原微生物自身性质：毒力、感染量、侵入途径 感染对象状况：免疫状况（性别、种族、年龄、怀孕、免疫耐受、免疫抑制、疾病等）
实验室安全防护措施力度（生物安全）：安全操作技术、安全设备、实验室设施的安全构造 11
实验室感染传播链及其控制手段 容器中的病原体 泄漏 预防接种 感染途径/ 感染剂量 传播 个人防护装备 易感宿主 规程/ 设备 潜伏期 传染病监测 12
危害评估的原则 病原微生物危害程度
不同的实验活动
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病原微生物危害程度
分类主要依据
微生物的致病性 。
致病性越强 ， 导致的疾病越严重 ， 其等级越高
微生物的传播方式和宿主范围 。
它们可能会受到当地人群已有的免疫水平 、 宿主群体的密度和流动 、 适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响
当地所具备的有效预防措施 。
包括：通过接种疫苗或给予抗血清的预防 （ 被动免疫 ）
；卫生措施 ， 例如食品和饮水的卫生；动物宿主或节肢动物媒介的控制
当地所具备的有效治疗措施 。
包括：被动免疫 、 暴露后接种疫苗以及使用抗生素 、 抗病毒药物和化学治疗药物 ， 还应考虑出现耐药菌株的可能性
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不同的实验活动的危害
对于同一病原微生物而言，从事不同的实验活动，操作者接触微生物的数量、浓度、可能的感染途径是不同的，一旦暴露，其后果也是不同的
对于不同的实验活动均应进行危害评估，以指导操作者采取合适的生物安全防护
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操作一次可产生各种严重程度微生物气溶胶的活动 16
根据以上实际情况，临床微生物实验室及免疫学病原体筛检的防护标准应该是 病原体
危害程度分类
实验活动 BSL 级别
各类肠道致病菌 3 类 （VC 2 类）
BSL-2 各类呼吸道致病菌 3 类 （TB 2 类）
BSL-2 各类条件致病菌 3 类 BSL-2 乙型肝炎病毒 3 类 BSL-2 丙型肝炎病毒 3 类 BSL-2 爱滋病病毒 2 类 BSL-2 梅毒螺旋体 3 类 BSL-2 17
• 二、临床实验室生物安全相关术语和定义
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• 生物安全 • 由动物、植物、微生物等生物给人类健康和自然环境可能造成不安全的防范；包括由现代生物技术的开发和应用可能产生的负面影响所采取的有效预防和控制措施。
• 实验室生物安全 • 避免危险生物因子造成实验室人员暴露，向实验室外扩散并导致危害的综合措施。
• 生物危险 • 生物因子将要或可能形成的危害，是伤害概率和严重性的综合。又称生物风险。
• 生物危害 • 由人为操作或人类活动而导致生物体或其产物对人体健康和生态环境的现实损害或潜在风险。这里的危害包括对操作者，其他相关人员、环境和其他生物的危害。
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• 气溶胶 • 悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001-100微米的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。
• 生物安全柜 • 负压过滤排风柜。防止操作者和环境暴露于实验过程中产生的生物气溶胶。
• 缓冲间 • 设置在清洁区，半污染区和污染区相邻两区之间的缓冲密闭室，具有通风系统，其两个门具有互锁功能，且不能同时处于开启状态。
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三、生物安全实验室 操作技术规范 21
• 所有操作人员必须经过培训 ， 通过考核 ， 获得 上岗证书 ；
• 在开始相关工作之前 ， 应对所从事的病原微生物及相关操作进行 危险评估 ， 根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果 ， 制定全面 、细致的标准操作规程和程序文件 ， 对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸；
• 熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则 ， 掌握 各种仪器 、 设备 、 装备的操作步骤和要点 ， 对于各种可能的危害应非常熟悉；
• 应掌握各种感染性物质操作的一般 准则和技术要点 。
生物安全意识至关重要
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实验室的生物安全规范
• 实验室的运行规范（ SOP ）
• 仪器设备的使用规范
• 针对感染性材料的操作规范
• 个人防护用品的使用规范
……
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1. 初级防护 : 保护工作人员: :
•
实验室操作和技术
- -
标准操作
- -
特殊操作
•
安全设备
: 初级屏障
2. 二级防护 : 保护环境
•
设施设计和建筑 : 二级屏障
生物安全原则
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安全设备（初级屏障）
防护服
实验室工作外套
手套
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安全设备（初级屏障）
人员防护设备
面部保护
眼部保护
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安全设备（初级屏障）
高压灭菌锅 洗眼/ 喷淋装置 27
• 根据生物危害性和实验室防护能力，将实验室分为四级。其中，对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人，动物和环境不会造成严重危害。有有效的预防和治疗措施的为二级。
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BSL-1和BSL-2实验室 • 实验室的进入 • 工作人员的防护要求 • 相关操作的指导原则 • 实验区的管理原则 • 实验室生物安全管理指导原则 29
BSL-1 30
BSL-2 标准的BSL-2 实验室除了满足BSL-1 的要求以外，在门上增加了 生物危险标志、II 级生物安全柜 。
按国标（GB19489-2008 ）, 还要 配备高压蒸汽灭菌器、洗眼器 31
（一）实验室的进入 • 未经批准 ， 任何人不得进入实验室工作区域 。
儿童不得进入实验室工作区域 。
可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不允许进入实验室 。
• BSL- -2 2 实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志 ， 包括通用的生物危险性标志 ， 标明传染因子 、 实验室负责人或其他人姓名 、 电话 、 以及进入实验室的特殊要求 。
• 实验室的门应保持关闭 。
• 工作人员进入动物房应当经过特别批准 。
• 与实验室工作无关的动物不得带入实验室 。
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（二）工作人员的防护要求 • 在实验室工作时 ， 必须穿着 合适的工作服或防护服 。
• 在进行可能接触到血液 、 体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时 ， 应戴上 合适的手套 。
手套用完后 ， 应先消毒再摘除 ， 随后必须洗手 。
• 在处理完感染性实验材料和动物后 ， 以及在离开实验室工作区域前 ， 都必须洗手 。
• 为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染 、 碰撞或人工紫外线辐射的伤害 ， 必须戴合适的 安全眼镜 、 面罩 （ 面具 ）
或其他防护设备 。
• 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域 。
• 不得在实验室内穿露脚趾的鞋 。
• 禁止在实验室工作区域进食 、 饮水 、 吸烟 、 化妆和处理隐形眼镜 。
• 禁止在实验室工作区域储存食品和饮料 。
• 在实验室内用过的防护服不得和日常服装 放在同一柜子内 。
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（三）有关操作的指导原则 • 严禁用口吸移液管, 严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。
• 所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。
• 应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。
• 实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。
• 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。
• 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室
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（四）实验室工作区的管理原则 • 实验室应保持清洁整齐 ， 严禁摆放和实验无关的物品 。
• 每天工作结束后应清除工作台面的污染 。
若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染 。
• 所有受到污染的材料 、 标本和培养物在废弃或清洁再利用之前 ，必须先清除污染 。
• 感染性材料的包装和运输应遵循国家和 ∕ 或国际的相关规定 。
• 如果窗户可以打开 ， 则应安装防止节肢动物进入的纱窗 。
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必须强调对污染的针头或利器的使用要非常谨慎。
对易于通过气溶胶途径传播的微生物、具有增加工作人员暴露气溶胶或高度飞溅物的程序
二级生物安全防护水平微生物操作必需在一级生物安全防护水平的基础之上，增加生物安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或面罩等。
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（五）生物安全管理的指导原则 • 实验室负责人 负责制订和采用 生物安全管理计划以及实验室安全或/ / 和操作手册 。
• 实验室应能提供常规的实验室 安全培训, ,
并建立制度 。
• 实验室负责人 （ 或生物安全负责人 ）
要将生物安全实验室的特殊危害 告知 实验室人员 ， 同时要求他们阅读生物安全或/ / 和操作手册 ， 并遵循标准的操作程序 。
实验室内应备有可供取阅的安全或/ / 或操作手册 。
所有实验室人员 必须经过培训 ， 了解所从事工作的危险 、 掌握有关的管理规定和操作程序 ， 通过考核后方可从事相关实验室工作 。
• 应当制订节肢动物和啮齿动物的 控制方案 。
• 如有必要 ， 应为所有实验室人员 提供适宜的医学评估 、 监测和治疗 ， 并建立健康档案 。
实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测 。
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• 四、临床实验室仪器设备的使用
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仪器相关危险
干燥器
爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出
培养物搅拌器，混合器，搅拌器
产生气溶胶、喷溅和溢出
皮下注射针头
意外接种 产生气溶胶或感染性物质溢出
离心机
产生气溶胶、溅出和管子破裂
超速离心机
管子破裂
高速搅拌器，组织匀浆器
飞沫、渗漏和容器破裂
超声波破碎机、超声波清洁器
产生气溶胶、听力受损、皮炎
冻干机（冷冻干燥机）
产生气溶胶、直接接触污染
水浴
微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆炸复合物
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II 级生物安全柜的使用 • 注意空气流动方向，使用高能灯替代酒精灯 • 定期做清洁，使用前后使用紫外线灭菌 41
II 级生物安全柜的气流方向
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二、离心机的使用
离心分类
转头转速（ rpm ）
微速离心
～ 15 , 00
低 / 高速离心
2,000 ～ 20,000
超速离心
～ 120 ,000
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离心可能造成的伤害途径 -
离心机机械故障
-
实验器材故障，如离心管等
-
产生气溶胶；
-
操作者失误。
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• 对于高致病性病原微生物 ， 必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险 。
－大型离心机上应加装负压罩 ， 以及时吸出离心机排出的气体 ， 并排至实验室的过滤通风系统 ， 在 BSL- -3 3 及以上级别实验室尤其要注意 。
－微型离心机则可放在安全柜内离心 ， 但要注意其对安全柜气流的影响 。
－如果不能在安全柜内离心也无负压罩 ， 则必须将密封的转头在安全柜内打开 。
－所有的离心管必须带盖密封 ， 其开启应在安全柜内进行 。
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生物安全转头
样品瓶外套是转头的一部分
样品瓶可于安全柜内打开
保证漏出的样品保留在瓶内
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三、搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用 • 使用的管子 、 盖子 、 杯子或瓶子都应该保持完好 ， 无裂隙 、 无变形 。盖...